毛細管電泳分析對進樣技術(shù)有哪些要求？

更新時間：2021-05-17 點擊次數(shù)：2039

電泳儀：專為進行電泳提供外加電場的直流電源，其輸出電壓或電流或功率要求相對穩(wěn)定或按特定規(guī)律變化。常用的電泳分析方法主要有：醋酸纖維素薄膜電泳、凝膠電泳、等電聚焦電泳、雙向電泳、毛細管電泳。其中，毛細管電泳分析對進樣技術(shù)要求很高，進樣操作事項如下：

1、進樣區(qū)帶越小越好：

無論采用何種進樣方式，毛細管插入樣品溶液的深度一般要少于毛細管總長度的1%～2%，以盡量減少樣品溶液經(jīng)毛細吸附進入毛細管而影響進樣量的性。樣品管中溶液少為5μL，進樣體積為1～50nL。

2、進樣時間以短為宜：

通常進樣時間為0.5～1s，此時毛細管粘附的樣品量相對于吸入的體積可忽略不計。

雖然毛細管電泳的進樣時間可至±0.1s，但由于毛細管插入樣品管時不可避免地會粘附一些溶液，進樣時間過短會影響分析的重復(fù)性。

3、樣品預(yù)濃縮：

受毛細管內(nèi)總體積的制約，對于濃度很稀的樣品，毛細管電泳不能象HPLC那樣可加大進樣量來提高檢測靈敏度，但可采取一些措施來改善。

* 當樣品緩沖液的電導(dǎo)明顯低于（100倍以上）電泳緩沖液時，毛細管兩端加上電壓后可在樣品區(qū)帶前后形成一個更大的電場，使樣品溶液中的分子遷移的更快。當這些分子到達電泳緩沖液邊界時，由于電場減弱，遷移速度減慢，使樣品區(qū)帶由寬變窄，濃度提高，而達到濃縮的目的。

* 當樣品緩沖液和電極緩沖液的電導(dǎo)一樣，而樣品濃度較稀，不適合再作稀釋時，可在進樣前先吸入一些水，也能達到濃縮的目的。

無論采取何種進樣方式，上述方法都可使樣品堆積濃縮。但由于在堆積區(qū)帶電勢陡降，會導(dǎo)致此區(qū)帶溫度升高。

4、毛細管插入樣品溶液后，應(yīng)立即開始進樣操作，完成后迅速移至緩沖液中開始電泳。否則會產(chǎn)生毛細作用和虹吸現(xiàn)象，引起誤差并使譜帶展寬。

5、電極不要和毛細管接觸，樣品貯器和緩沖液貯器液面的高度應(yīng)保持平衡。

6、使系統(tǒng)盡可能保持恒溫。因溫度直接影響粘度，而影響進樣量的恒定。

7、樣品溶液中的溶劑必須與緩沖液互溶，前者的離子強度應(yīng)低于后者。

8、防止樣品溶液和緩沖液蒸發(fā)、損耗。